کلون سازی و بیان ژن میدکاین نوترکیب انسانی در اشریشیاکولای سویه ی اوریگامی

Authors

سعادت الله غفاری

دانشگاه آزاد اسلامی واحد پزشکی تهران علی اصغر دلدار

گروه ژنتیک و بیوشیمی دانشگاه صنعتی مالک اشتر تهران علی بهرامی

گروه ژنتیک و بیوشیمی دانشگاه صنعتی مالک اشتر تهران عمران اسماعیل زاده

گروه ژنتیک مولکولی، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری تهران بهارک مهیاد

abstract

هدف: هدف این پژوهش کلون سازی و بیان ژن کد کننده‏ی میدکاین انسانی در اشریشیاکولای بوده که پس از انجام مراحل لازم در مقیاس آزمایشگاهی محقق گردید. مواد و روش‏ها: روش ها شامل کشت سلول، استخراج rna، ساخت cdna، تکنیک های کلون سازی، القای بیان با iptg (ایزوپروپیل تیوگالاکتوزیداز)، ارزیابی بیان به‏وسیله ی ژل پلی اکریل آمید و تایید توسط وسترن بلات بود. نتایج: ژن میدکاین در pet-21a(+) کلون و سپس به اوریگامی منتقل شد. این فاکتور رشد در کلونی حاوی pet-21a(+) نوترکیب پس از 16 ساعت انکوباسیون در دمای 18 درجه سانتی‏گراد با هم زدن در 250 دور در دقیقه، در سطح سیتوپلاسمی بیان گردید. بیان پروتئین 13 کیلودالتونی دارای دم هیستیدینی از طریق وسترن بلات مورد تایید قرار گرفت. نتیجه گیری: با توجه به اینکه سویه اوریگامی در ژن های trxb و gor جهش یافته است، سینوپلاسم محیطی اکسید کننده می باشد، به‏همین سبب باعث افزایش تشکیل باندهای دی سولفید می‏شود. بنابراین به‏نظر می‏رسد که پس از بیان میدکاین، باقی مانده‏های سیتوزین به‏صورت محلول باقی می‏مانند. این شرایط باعث به‏وجود آمدن محیط مناسبی برای فولدینگ صحیح پروتئین و حل شدن آن می‏شود.

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

کلون سازی و بیان ژن میدکاین نوترکیب انسانی در اشریشیاکولای سویه‌ی اوریگامی

هدف: هدف این پژوهش کلون سازی و بیان ژن کد کننده‏ی میدکاین انسانی در اشریشیاکولای بوده که پس از انجام مراحل لازم در مقیاس آزمایشگاهی محقق گردید. مواد و روش‏ها: روش‌ها شامل کشت سلول، استخراج RNA، ساخت cDNA، تکنیک‌های کلون‌سازی، القای بیان با IPTG (ایزوپروپیل‌تیوگالاکتوزیداز)، ارزیابی بیان به‏وسیله‌ی ژل پلی‌اکریل‌آمید و تایید توسط وسترن بلات بود. نتایج: ژن میدکاین در pET-21a(+) کلون و سپس به اور...

full text

کلون سازی و بیان ژن هیرودین نوترکیب در رده سلولی CHO

هیرودین پروتئینی به طول 66-65 اسیدآمینه می باشد که از غدد بزاقی زالو ترشح و به عنوان یک داروی ضدانعقاد مطرح است. این دارو مهارکننده بسیار قوی ترومبین بوده و در ممانعت از ترومبوسهای عروقی موثر است. هدف از این تحقیق بررسی بیان ژن هیرودین در سلول های  CHO به عنوان یک سلول یوکاریوتی بود. در مطالعه حاضر، قطعه 221 بازی ژن هیرودین در وکتور pcDNA3.1(+) کلون گردید. وکتور نوترکیب هیرودین در سلول CHO با ا...

full text

کلون و بیان ژن نوترکیب هومون رشد با استفاده از برچسب تیوردوکسین

هدف: در قرن حاضر، تولید داروهای نوترکیب افزایش یافته است. از جمله این داروها، هورمون رشد می‏باشد که به‏علت مشکلاتی که در پروسه­ی بیان نوع سیتوپلاسمی و پری پلاسمی این پروتئین وجود دارد، یافتن راه حلی که بتواند بیان را بهینه نماید ضروری به‏نظر می‏رسد. لذا در این تحقیق با استفاده نمودن از trx-tag بیان هورمون رشد را به‏صورت محلول بهینه شد که علاوه بر افزایش بیان پرتئین (حل مشکل پری...

full text

استرپتوکیناز: استخراج،کلون سازی و بیان بالای پروتئین نوترکیب فعال

چکیده سابقه و هدف: استرپتوکیناز به عنوان شناخته شده ترین داروی فیبرینولیتیک، مدت مدیدی است در درمان سکته قلبی استفاده می شود. ویژگیهای ساختاری ساده این پروتئین زمینه لازم برای دستیابی به انواع نوترکیب آن را فراهم ساخته است. هدف از این تحقیق تهیه سوش استرپتوکوک equisimilis h46a (پربازده از نظر تولید استرپتوکیناز) برای اولین بار در ایران بود تا پس از استخراجdna ، ژن استرپتوکیناز بگونه ای تکثیر شو...

full text

تعیین توالی ژن، کلونینگ و بیان آل- آسپاراژیناز نوترکیب از سودوموناس آیروجینوزا سویه SN4 در اشریشیاکلی

مقدمه: ال- آسپاراژیناز جایگاه با ارزشی از جنبه کاربردهای پزشکی و صنایع غذایی دارد. تقاضا برای این آنزیم دارویی هرساله چندین برابر می‏شود. مواد و روش‏‏ها: در این پژوهش، یک آسپاراژیناز از سودوموناس ایروجینوزا سویه SN4، تعیین توالی و در اشریشیاکلی کلون شد. پرایمر‏ها بر اساس آل- آسپاراژیناز از سودوموناس ایروجینوزا سویه DSM50071 طراحی شدند که بر اساس توالی ژن 16S rRNA شباهت بالایی را نسبت به سویه S...

full text

بیان آلبومین سرم انسانی نوترکیب در باکتری اشرشیا کلی سویه (DE3) BL21

سابقه وهدف: آلبومین سرم انسان از مهم ترین ترکیبات سیستم گردش خون می باشد . این پروتئین حامل بسیاری از هورمون ها ومتابولیت ها در بدن بوده و در تثبیت حجم خون و درمان انواع سوختگی ها مؤثر می باشد. چون تهیه آن از پلاسمای خون پرهزینه بوده و همراه با آلودگی به پاتوژن ها ی مختلف است، تولید آن توسط روش های بیوتکنولوژی ضروری به نظر می رسد مواد و روش ها: ژن آلبومین سرم انسان ( HSA ) براساس توالی موجود در...

full text

My Resources

Save resource for easier access later


Journal title:
سلول و بافت

جلد ۶، شماره ۲، صفحات ۱۴۳-۱۵۱

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023